标签：生物反应器，细胞培养，微载体，接种，实验方法 

Vero细胞近年来作为新时代制药产业的热门细胞，成为转基因、蛋白、抗体类制药企业普遍使用使用的载体工具。使用细胞生物反应器进行Vero细胞的规模化增殖的接种工艺如下：

一、实验前准备：

细胞∶Vero 细胞（ATCC级别的 ）、DMEM培养基(Hyclone)、新生牛血清、抗生素、除菌滤膜、CT-3微载体、2L实验室生物反应器，5L搏旅细胞培养生物反应器、摇瓶、细胞培养瓶、水浴锅。

二、接种实验方法

1.微载体的预处理和灭菌： 接种实验前的微载体需要用无钙、镁离子的PBS磷酸盐缓冲液进行吸胀、洗涤，之后进行高压灭菌处理，工艺控制参数为：吸胀质量浓度不超过50 g·L-1，灭菌温度121 ℃，20 min。

2.转瓶接种操作：

将培养瓶内的 Vero 细胞接种于500ML的转瓶内，CT-3 微载体浓度为 3g/L，并加入适量的混合牛血清的DMEM培养基，此时接种密度以2.0×10°cells/mL为宜。

在微载体细胞生长过程中，可适当补加微载体 2g/L，使微载体浓度达到 5g/L即可接种在5L细胞培养生物反应器中作为种子细胞进行培养。

3.规模扩培接种操作

（4）当细胞生长到达指定密度时，将细胞及新的微载体一起转入大容积的微载体培养养反应器中，进行细胞培养。此过程的工艺参数为：温控： 37士0.1℃，溶解氧为 50%空气饱和度，搅拌器的转速维持在20～32 r/min即可。当细胞密度达 1.1×10'cells/mL时，即可进入下游环节进行产品生产。

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