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天根试剂盒-DNA纯化胶回收试剂盒-DP214
产品简介：
本试剂盒采用缓冲体系和离心吸附柱，既可从TAE 或TBE 琼脂糖凝胶中回收DNA 片段，又可用于直接纯化PCR 产物，能够满足多种实验需要。溶胶液PC 中含有pH 指示剂，可根据颜色来判断溶胶状态。使用本产品可回收100 bp- 8 kb 大小的DNA 片段，回收率 可达80%。使用本试剂盒回收的DNA 可直接用于连接、转化、酶切、测序等分子生物学实验。
产品特点：
■ 兼容性强：既可用作DNA 产物直接纯化，又可用作DNA 凝胶回收。
■ 操作简便、可回收胶体积大：可按照胶块与溶胶液等比进行溶胶。
■ 稳定、可靠：配有指示剂，可直观判断影响DNA 吸附的pH 值，又可判断DNA 与膜是否充分结合，提高回收效率。
产品组成：
DP214-02 (50 preps)：
溶液PC(Buffer PC) 25 ml
平衡液BL(Buffer BL) 30 ml
漂洗液PW(Buffer PW) 15 ml
洗脱缓冲液EB(Buffer EB) 15 ml
吸附柱CB2(Spin Columns CB2)50个 50个 5 个
收集管(2 ml)(Collection Tubes (2 ml)) 切胶器(Gel Cutter) 。
DP214-03 (200preps)：
溶液PC(Buffer PC) 100 ml
平衡液BL(Buffer BL) 120 ml
漂洗液PW(Buffer PW) 50 ml
洗脱缓冲液EB(Buffer EB) 30 ml
吸附柱CB2(Spin Columns CB2) 200个 200个 20个
收集管(2 ml)(Collection Tubes (2 ml)) 切胶器(Gel Cutter) 。
储 存 条 件
该试剂盒所有组分置于室温(15-30℃)干燥条件下，可保存12个月。若溶液产生沉 淀，使用前可在37℃水浴中预热10min以溶解沉淀，不影响效果。
产 品 简 介
本试剂盒采用独特的离心吸附柱，既能从TAE或TBE琼脂糖凝胶中回收DNA片段，又 能用于直接纯化PCR产物，满足多种实验需要。溶液PC中含有pH指示剂，可根据颜色来 判断溶胶或PCR产物回收是否达到最佳状态。使用本产品可回收100 bp-8 kb大小的DNA 片段，回收率可达80%,大于8 kb的DNA片段纯化建议使用我公司的琼脂糖凝胶回收试剂 盒DP208/209或DNA产物纯化试剂盒DP203/204。每个离心吸附柱每次可吸附的DNA量为 10 μg。
使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、文库筛选、 连接和转化等实验。
注 意 事 项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1. 平衡液BL的加入能够改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和稳定性，消除高温 /潮湿或其他不良环境因素对吸附柱造成的影响。使用前请先检查平衡液BL是否出现浑 浊，如有混浊现象，可在37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。
2. 溶液PC含有pH指示剂，为黄色，指示pH≤7.5。
天根试剂盒-DNA纯化胶回收试剂盒-DP214操 作 步 骤
使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。
一 、从 琼 脂 糖 凝 胶 中 回 收 D N A 片 段
1. 柱平衡步骤：向吸附柱CB2中( 吸附柱放入收集管中) 加入500μl平衡液BL,12 .000 rpm (~13.400×g )离心1 min,倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 （请 使 用 当天处理过的柱子)
2. 将单 一 的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下 l尽量切除多余部分) 放入干净的离心管 中，称取重量。
注意：使用切胶器(OSE-GC)切胶时，切胶器口对准琼脂糖凝胶中
的DNA条带下压切割。切胶完成后，推动中心杆，将胶块推入干净
的离心管中。根据凝胶胶孔宽度可进行单次和连续切割。
3. 向胶块中加入等倍体积溶液PC(如果凝胶重为0.1 g,其体积可视为100 μl,则加入100 μl PC溶液。使用切胶器切割1%的琼脂糖凝胶，单块重量约为0.06 g,实际胶块重量与凝胶 浓度及厚度相关),50℃水浴放置10 min左右，其间不断温和地上下翻转离心管，以确 保胶块充分溶解。 ( 若胶块的体积过大，可事先将胶块切成碎块)
注意：对于回收<150 bp的小片段可将溶液PC的体积增加到3倍以提高回收率；胶块完全 溶解后最好将溶液温度降至室温再上柱，因为吸附柱在室温时结合DNA的能力较强。凝 胶完全融解后应呈现黄色，即可进行后续操作。如果胶完全融解后溶液的颜色为桔红色 或紫色，请使用10 μl 3M乙酸钠(pH 5.0)将溶液的颜色调为黄色后再进行后续操作。
(溶液PC中含有pH指示剂，当pH≤7.5时溶液的颜色为黄色，此时DNA才能够有效的与 膜结合，当pH值偏高时溶液的颜色变为桔红色和紫色，需要进行调整。)
4. 将上一 步所得溶液加入一个吸附柱CB2中( 吸附柱放入收集管中) ,12,000 rpm(~13,400×g)离心1 min,倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB2放入收集管中。
5. 向吸附柱CB2中加入600 μl漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇) ,12.000 rpm (~13,400×g)离心1 min,倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB2放入收集管中。
注意：如果回收的DNA是用于盐敏感的实验，例如平末端连接实验或直接测序，建议PW 加入后静置2-5 min再离心。
6. 重复操作步骤5
7. 将吸附柱CB2放入收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min,尽量除去漂洗液。将 吸附柱置于室温放置数分钟，彻底晾干。
注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
8. 将吸附柱CB2放入一个干净离心管中， 向吸附膜中间位置悬空滴加适量) 的洗脱缓冲液 EB, (如果回收的目的片段>4 kb,则洗脱缓冲液EB应置于65-70℃水浴预热),室温放 置2 min 。12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min,收集DNA溶液。
注意：洗脱液的体积不应少于30 ,体积过少会影响回收的效率。洗脱 液的pH值对于 洗脱效率有较大影响。若后续做测序，需使用ddH2O做洗脱液，并保证其pH值在7.0-8.5 范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。为
1 了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中，室温放置2 min, 12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min,将DNA溶液收集到离心管中。
二 、 从 P C R 反 应 液 或 酶 切 反 应 液 中 回 收 D N A
1. 柱平衡步骤：向吸附柱CB2中(吸附柱放入收集管中)加入500 μl的平衡液BL,12,000 rpm (~13,400×g )离心1 min,倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。(请使用 当天处理过的柱子)
2. 估计PCR反应液或酶切反应液的体积，向其中加入等倍体积溶液PC,充分混匀(无需去 除石蜡油或矿物油)。
注意：对于回收<150 bp的小片段可将溶液PC的体积增加到3倍以提高回收率；溶液混匀 后应呈现黄色，即可进行后续操作。如果溶液的颜色为桔红色或紫色，请使用10 μl 3M乙 酸钠(pH 5.0)将溶液的颜色调为黄色后再进行后续操作。
3. 将上 一 步所得溶液加入 一 个吸附柱CB2中(吸附柱放入收集管中),室温放2 min, 12,000 rpm(~13,400×g)离心1 min,倒掉收集管中的废液，将吸附柱放入收集管中。
注意：吸附柱容积为800 μl,若样品体积大于800p可分批加入。
4. 向吸附柱CB2中加入600 ul漂洗液PW (使用前请先检查是否已加入无水乙醇) ,12.000 rpm (~13,400×g)离心1 min,倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB2放入收集管中。
注意：如果纯化的DNA是用于盐敏感的实验，例如平末端连接实验或直接测序，建议PW 加入后静置2-5 min再离心。
5. 重复操作步骤4.
6. 将吸附柱CB2放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min,尽量除去漂洗液。将 吸附柱CB2置于室温放置数分钟，彻底地晾干。
注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
7. 将吸附柱CB2放入一个干净的离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加适量的洗脱缓冲液
EB,(如果回收的目的片段>4 kb,则洗脱缓冲液EB应置于65-70℃水浴预热),室温放
置2 min 。12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min收集DNA溶液。
注意：洗脱液的体积不应少于30 μl,体积过少会影响回收的效率。洗脱液的pH值对于 洗脱效率有较大影响。若后续做测序，需使用ddH₂O做洗脱液，并保证其pH值在7.0-
8.5范围内，且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。为了提高DNA的回收量，可将 离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中，室温放置2 min,12,000 rpm(~13,400×g)离 心2 min,将DNA溶液收集到离心管中。
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