使用质粒提取试剂盒进行质粒提取时常常会遇到质粒浓度低，质粒提取效果不理想等问题，那么提取质粒浓度低的原因有哪些呢？

一、细菌离心后，加入溶液蜗旋振荡时，发现菌体呈絮状不易混匀，或成细砂样。

   很可能是细菌发生溶菌，可减少培养时间、降低培养温度试试看，通常降低培养温度 会使细菌生长更加稳定；同时也可以试试平板培养，培养后，用PBS将菌落洗下，再进行质粒的提取，固体培养基上细菌生长的要好一些。

二、加入溶液Ⅱ，菌液浑浊度没有发生明显变化。

    裂解不完全，主要问题是发生在溶液Ⅱ上。确保10%SDS是澄清的，确认NaOH是有效的，如使用的是试剂盒，确认溶液I是澄清没有沉淀的。如确认原因不是发生在溶液II上，而是细菌浓度比较高，可相应增加溶液I/III的体积。此外，还有可能是"杂菌"污染。

三、加入酚仿抽提，离心后在水相和有机相间没有变性蛋白层，但随后的乙醇沉淀发现大量的半透明沉淀，溶解后蛋白浓度高。

   乙醇沉淀时，较纯的质粒沉淀应该是白色（PEG纯化的沉淀是透明的，肉眼不易发现），如沉淀是半透明的凝胶状，则是蛋白含量高。出现此类问题时确认两点∶

1.平衡酚是否被氧化、pH是否是8.0。

2.溶液III/Ⅲ反应后，离心的上清pH是否在8.0左右。有时，由于溶液Ⅲ配置的问题，导致溶液I/IIL反应后离心的上清pH与8.0偏差较大，导致平衡酚抽提时没有有效的将蛋白抽提出来，有时，离谱的pH会导致水相和平衡酚互溶。

四、使用酚仿抽提方法，质粒A260/A280的纯度也很好，但酶切不能完全切开。

1.确认酶的有效性；

2.平衡酚是否被氧化而呈现棕色，而非正常的黄色；

3.是否不小心吸入了痕量的酚；

4.乙醇沉淀后，70%乙醇漂洗的是否充分，残留的盐类会影响酶切；

5.乙醇漂洗后是否完全干燥，残留的乙醇会影响酶切；

五、 提取质粒中RNA没有去除。

主要原因是RNase失效，或效率不高。

建议∶1.更换RNase A，并保证其储存条件是正确的；

2. 对于手工提取质粒，可单独增加一步去处RNA的步骤，即溶液Ⅲ反应后，离心的上清中加RNase，室温37度去RNA10min~30min，但需要保证你的RNase A是经过失活DNase的，同时较高温度（如50度）会更加快速完全的去除RNA，但本人经验，经过高温处理的质粒质量也不高。

六、传统手工大提质粒，使用PEG8000纯化的问题。

     A .PEG8000不需要灭菌，当然，你要确认你的PEG8000是分子生物学使用级别（我们一直使用的SIGMA的）；

B.如果PEG8000纯化后的得率很低，需要确认一下∶加入PEG8000前，质粒溶液是否是TE，而不是含有大量其它杂盐得溶液。在PEG8000纯化前，质粒溶液应该是经过乙醇或异丙醇沉淀，且经过70%乙醇漂洗过的；沉淀步骤应在冰上或4度进行。

C. 关于PEG8000处理后离心看不见沉淀的问题∶PEG8000的沉淀是透明的，有时可以看到沉淀，而有时很难辨出沉淀

七、 试剂盒提取质粒也会成为提取质粒浓度低的原因。

     检查漂洗液，是否配置太久，而且在使用后没有旋紧盖子。

八、培养基、抗生素、质粒提取都没有问题，而细菌菌液提取不到质粒。

        可以使用细菌质粒提取试剂盒。

九、 原先测序鉴定没有问题的细菌，37度摇菌后发现质粒大小或序列出现异常。————这种情况出现的几率较小。常出现在较大质粒或比较特殊的序列中。

解决办法∶

a.降低培养温度，在20~25度下培养，或室温培养可明显减少发生概率；

b.使用一些特殊菌株，如Sure菌株，它缺失了一些重组酶，如rec类等，使得质粒复制更加稳定。

苏州beat365官网登录入口生物提供天根质粒小提试剂盒、质粒大提试剂盒、细菌基因组提取试剂盒、DNA纯化胶回收试剂盒、血液基因组提取试剂盒等样本保护与处理基因组DNA提取 质粒，提取总RNA提取DNA产物纯化/胶回收 PCR系列，RT-PCR系列荧光定量PCR系列， NGS文库制备 表观遗传学系列，克隆和点突变DNA分子量标准蛋白表达和检测试剂盒等，更多提取质粒浓度低的原因 相关问题可以 0512-62956104或18934597460 进行咨询。

---

beat365官网登录入口成立于2008年，位于苏州园区生物纳米园（Biobay）A5幢301室。公司管理团队专注于科学仪器行业十四年，拥有专业的技术团队与完善的售后服务体系，目前已为300余家实验室提供优质产品和服务，涵盖各大高校、检测中心、科研机构、制药企业等13个群体。提供的实验室仪器主要包括振荡培养箱，PCR仪，移液器，生物反应器，发酵罐，移液器，超低温冰箱，医用冰箱，液氮罐，高压灭菌器，超纯水机，天平，离心机，离心浓缩仪等。厂商企业授权包括知楚仪器、朗基、中科美菱，梅特勒，乐枫，搏旅、NEST、天根、奥盛在内的80个余厂家。

  在提供产品的同时也为您提供生物实验室常用的耗材试剂，以及实验室整体搬迁、第三方检测、计量与校准，二手仪器调剂等服务。完整的实验室一站式体验使您的选择更加方便、快捷、灵活。 

  beat365官网登录入口性价比：厂商直接授权代理；一手货源；进口品质，国产价格； 

  beat365官网登录入口交货期：自有仓库，标准品有库存，常规试剂耗材备有现货；  

 beat365官网登录入口服务项目：实验室现场规划，提供选型建议，合理化配置; 

  beat365官网登录入口售后服务：及时响应，2小时给出解决方案，12小时内响应服务。

  beat365官网登录入口增值服务：提供样机体验，提供样品试用，安装指导，技术指导  

  beat365官网登录入口质保期：终身质保，免费更换配件