天根 KR211 miRcute增强型miRNA DNA合成试剂盒
天根 KR211 miRcute增强型miRNA DNA合成试剂盒采用加A法来进行miRNA cDNA的反转录。
本试剂盒采用了双组分形式,简化了实验操作流程,降低了操作失误的可能性。
试剂盒中的miRNA RT Enzyme Mix包含了E.coli Poly(A) Polymerase、RTase和RNasin,其中的E.coli Poly(A) Polymerase不但具有高*效的加A尾效率,还可特异性识别单链 miRNA,避免了具有双链结构的miRNA前体的进一步逆转录反应;RTase经过分子改造,去掉了RNase H活性,增加了RNA模板亲和力,从而使得miRNA的逆转录反应具有较高的效率和灵敏度。
试剂盒中的2× miRNA RT Reaction Buffer包含了miRNA加A尾反应和逆转录反应的所有原料和引物,并经过精心优化,可保证miRNA 3'末端的Poly(A)修饰过程和 逆转录过程同时高效进行。
1. 省时省力。本试剂盒将miRNA的加A尾反应和逆转录反应合二为一,在减少操作步骤的同时也节省了一半的反应时间。另外,本试剂盒为双组分形式,操作过程中只需加入RNA模板和两个组分即可进行miRNA的逆转录反应,进一步简化了操作。
2. 特异性强。本试剂盒中的E.coli Poly(A) Polymerase和RTase都只针对单链的miRNA进行修饰和逆转录反应,可避免具有二级结构的miRNA前体进行逆转录反应。
3. 灵敏度高。本试剂盒通过将加A尾反应和逆转录反应的整合,实现了miRNA的加A产物可全部进行进一步的逆转录反应,大大提高了低丰度miRNA的检出率。
4. 适用广泛。本试剂盒可针对几乎所有材料提取的miRNA进行逆转录反应,模板的使用范围可达20 pg-2 μg(质量范围)和10 fM-100 pM (浓度范围)。
染料法/探针法miRNA的荧光定量研究
本试剂盒须与miRcute Plus miRNA荧光定量检测试剂盒(FP411)配套使用
图1. 使用TIANGEN miRcute增强型miRNA cDNA 第一链合成试剂盒(KR211)分别与国外知名Q公司(左)和国内T公司(右)的同类产品反转录人类miRNA mimics mix,之后用荧光定量检测
hsa-miR-133a-3p。结果显示,对于同一RNA样本,与竞品(蓝色线)相比TIANGEN KR211(红色线)反转录之后得到的cDNA量更大。KR211具有更高的反转效率。miRNA mimics mix上样量:2×108 copies;反转录体系:20 μl,取2 μl定量;定量试剂:TIANGEN miRcute增强型miRNA荧光定量检测试剂盒(SYBR Green)(FP411);使用仪器:ABI 7500 fast。
图2. 使用TIANGEN miRcute增强型miRNA cDNA第一链合成试剂盒(KR211,上排)与国外知名Q公司(下排)的同类产品分别反转录人类Total RNA,之后 用荧光定量检测hsa-miR-122-5p。结果显示,对于同一RNA样本,与竞品相比TIANGEN KR211具有更高的灵敏度和稳定性,更适合下游实验。Human Huh7细胞Total RNA提取采用TRNzol Universal(DP424)。反转录上样量:100 ng-1 pg;反转录体系:20 μl,取2 μl
定量;定量试剂:TIANGEN miRcute增强型miRNA荧光定量检测试剂盒(SYBR Green)(FP411);使用仪器:ABI 7500 fast。
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天根的产品线包括基因组DNA提取,RNA提取,质粒提取,DNA产物纯化和凝胶回收,PCR/RT-PCR及qPCR产品,表观遗传学相关(miRNA提取及检测试剂盒和甲基化相关试剂盒),二代测序(NGS)文库构建产品和科技服务,克隆和点突变产品,无细胞蛋白表达,蛋白质检测相关产品。还提供实验室常用仪器和自动化工作站,自动化核酸提取仪及配套试剂,开放式主流自动化核酸提取平台的整合方案。
天根的产品广泛应用于生命科学、医学、农业、制药、环境等领域的基础研究。客户遍布大学、研究所、医院、检验所、血站、出入境检验检疫等单位。
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