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天根试剂盒- 高效植物基因组DNA提取试剂盒
产品介绍
天根试剂盒-高效植物基因组DNA提取试剂盒 采用可以DNA的离心吸附柱自配的裂解缓冲液系统,能够高效提取多种不同植物组织中的基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司新型材料, 高效吸附DNA,可有效去除杂质蛋白。配套的裂解缓冲液可以高效裂解植物细胞,保护DNA的完整性,提高基因组DNA浓度。提取的基因组DNA片段大,纯度得率高,质量稳定可靠。
使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、 Southern等实验。
储存条件
试剂置于室温(15-30℃)干燥条件下可保存12个月;更长时间的保存可置于2-8℃。
使用中若产生沉淀,使用前应先将试剂盒内的溶液在室温中放置一段时间,必要 时可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀。
产品特点
请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1.样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
2.缓冲液FGA可能发黄,并不影响提取效果。
3.若缓冲液FGA或LP2有沉淀析出,可在37℃水浴溶解,摇匀后使用。
4.所有离心步骤均为使用台式离心机,室温下离心。
天根试剂盒-高效植物基因组DNA提取试剂盒说明书
使用前请先在缓冲液LP3和漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。
1. 处理材料: 取植物新鲜组织100 mg或干重组织20 mg,加入液氮充分碾磨。加入400 μl缓冲液FGA和 6 μl RNase A(10 mg/ml),旋涡振荡1 min,室温放置10 min。
2. 加入130 μl缓冲液LP2,充分混匀,旋涡振荡1 min。
3. 12,000 rpm(~13,400×g)离心5 min,将上清移至新的离心管中。
4. 加入1.5倍体积的缓冲液LP3(例如500 μl的滤液加750 μl缓冲液LP3) (使用前请先检查是否 已加入无水乙醇),立即充分振荡混匀15 sec,此时可能会出现絮状沉淀。
5. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中(吸附柱放入收集管中), 12,000 rpm(~13,400×g)离心30 sec,倒掉废液,吸附柱CB3放入收集管中。
6. 向吸附柱CB3中加入600 μl 漂洗液PW (使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm(~13,400×g)离心30 sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放入收集管中。
注意:如果吸附柱膜呈现绿色,向吸附柱CB3中加入500 μl无水乙醇,12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放入收集管中。
7. 重复操作步骤6.
8. 将吸附柱CB3放回收集管中,12,000 rpm (~13,400×g) 离心2 min,倒掉废液。将吸附柱 CB3置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,漂洗液中乙醇的残留会影响后续 的酶反应(酶切、PCR等)实验。
9. 将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200 μl洗脱缓 冲液TB,室温放置2-5 min,12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min,将溶液收集到离心 管中。 注意:为增加基因组DNA的得率,可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中,室温放置2 min,12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min。洗脱缓冲液体积不应少于50 μl,体积过小 影响回收效率。
洗脱液的pH值对于洗脱效率有较大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其 pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率;且DNA产物应保存在-20℃,以防 DNA降解。
DNA浓度及纯度检测 得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。
回收 得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
DNA应在OD260处有显著吸收峰,OD260值为1相当于大约50 μg/ml双链DNA、40 μg/ml 单链DNA。
OD260/OD280比值应为1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用ddH2O,比值会偏 低,因为pH值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。
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